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養(yǎng)殖場非洲豬瘟病毒變異株防控技術(shù)指南

中國動物疫病預(yù)防控制中心

國家非洲豬瘟區(qū)域?qū)嶒炇?/span>(廣州)

為指導(dǎo)養(yǎng)殖場及時發(fā)現(xiàn)非洲豬瘟病毒變異株,提升非洲豬瘟 防控能力,制定本技術(shù)指南.

一、病毒特點

非洲豬瘟病毒變異株包括基因缺失株、自然變異株、自然弱毒 株等.與2018 年傳入的非洲豬瘟病毒毒株相比,變異株基因組序 列發(fā)生不同程度的改變,包括核苷酸突變、缺失、插入或短片段替 換等,部分變異株失去紅細胞吸附活性.

從生物學(xué)特性看,部分病毒單基因缺失株的致病力與感染劑 量呈相關(guān)性,病毒雙基因缺失株感染豬可間歇性排毒,病毒可以水 平傳播.部分失去紅細胞吸附活性的變異株具有水平傳播能力, 高劑量感染能引起亞急性或慢性病程,部分豬只死亡,低劑量感染 引起非致死性的持續(xù)感染。從傳播性看,非洲豬瘟病毒變異株臨 床傳播性與經(jīng)典毒株無明顯區(qū)別。從臨床特點看,臨床癥狀不典 型,與2018 年傳入毒株有明顯差異,常表現(xiàn)為采食量下降、體表發(fā)

紅、皮膚壞死、淋巴結(jié)腫大、肺炎等癥狀;顯微鏡下多器官特別是淋

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巴結(jié)和腎臟可見伴有梗塞和血栓的壞死和出血區(qū),以及慢性纖維 化病變。，從易感性看,妊娠母豬和育肥豬的易感性無明顯差異,妊 娠母豬群體生產(chǎn)性能受影響較大.病毒感染潛伏期過后,母豬表 現(xiàn)反復(fù)發(fā)燒,不食等癥狀,部分母豬出現(xiàn)流產(chǎn)、高比例死胎、乳房結(jié) 痂等癥狀;初生仔豬活力差;育肥群靜止?fàn)顟B(tài)下的癥狀不顯著,應(yīng) 激情況下可排毒,表現(xiàn)皮膚壞死,關(guān)節(jié)腫大,脾臟腫大、壞死等臨床 癥狀和剖檢變化。

二、防控難點

(一) 隱蔽性強

非洲豬瘟病毒變異株感染潛伏期長,病豬初期無臨床表現(xiàn)或 臨床癥狀不典型,致死率較低,不易被識別.感染變異株的豬群口 腔排毒滯后,排毒不規(guī)律,采樣檢測很難及時發(fā)現(xiàn),導(dǎo)致豬群隱性 帶毒并間歇性排毒,很難做到精準(zhǔn)清除,并且經(jīng)多次轉(zhuǎn)群、并群等 操作,感染源可能遍布多棟豬舍,呈現(xiàn)多點同時發(fā)病的特點.實踐 中,常有豬場在實時熒光定量PCR 方法檢測時Ct 值較高,但因豬 只臨床表現(xiàn)健康,未能及時采取有效措施,致使豬只在應(yīng)激和混合 感染等因素誘發(fā)下發(fā)病。

(二) 檢測難度大

非洲豬瘟病毒變異株感染前期病毒滴度較低,感染后產(chǎn)生抗 體延遲,常規(guī)鑒別診斷方法有局限性,在出現(xiàn)變異株的情況下,容

易造成誤判.此外,過高頻次的全群普查也會增加交叉污染或擴

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散風(fēng)險.因此如果監(jiān)測方案和檢測方法選擇不當(dāng),有可能造成病 毒傳播和擴散。

三、防控措施

(一) 加強臨床巡視

做好技術(shù)培訓(xùn),提高飼養(yǎng)人員識別能力,一旦發(fā)現(xiàn)豬只出現(xiàn)嗜 睡、輕觸不起、采食量減少、拱料不食、發(fā)熱、皮膚發(fā)紅、關(guān)節(jié)腫脹/ 壞死、咳喘、腹式呼吸,育肥豬死淘率增高,母豬流產(chǎn)或出現(xiàn)死胎/ 木乃伊胎等可疑臨床表現(xiàn)時,第一時間采樣檢測.有條件的養(yǎng)殖 場可使用紅外線熱成像儀對所有豬群進行每日一次的體溫監(jiān)測, 發(fā)現(xiàn)體溫異常豬只,及時進行采樣檢測.通過每日體溫篩查,減少 豬場采樣頻次,達到降本增效目的.

(二) 優(yōu)化監(jiān)測方案

針對變異株的病原特點,優(yōu)化監(jiān)測方案.每日開展豬場場內(nèi) 巡欄,監(jiān)測豬群臨床癥狀和體溫變化.定期開展場外環(huán)境采樣檢 測。每周對豬群進行病原和抗體監(jiān)測。監(jiān)測采樣時可對全群進行 20~30% 比率的抽樣檢測.在豬群進行疫苗接種、轉(zhuǎn)群、去勢,或 母豬分娩后,開展抽樣檢測.一旦豬只出現(xiàn)疑似臨床癥狀,立即采 樣檢測。

育肥豬群:豬場發(fā)現(xiàn)臨床異常豬只后,立即對育肥豬群進行大 欄棉繩口腔液采樣,及時送檢進行病原檢測.

產(chǎn)房:在母豬分娩后,采集臍帶血、胎衣或胎衣液等樣品以及

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母豬口鼻拭子聯(lián)合尾根血混樣樣品進行病原檢測。

病死豬:在確保養(yǎng)殖場內(nèi)生物安全的情況下,及時采集病死豬 淋巴結(jié)、肺臟等樣品在當(dāng)天送檢。有研究報道非洲豬瘟病毒變異 株在豬淋巴結(jié)、肺臟病毒載量最高,采集相應(yīng)組織樣品進行檢測, 可提高檢出率。

環(huán)境:定期對豬場內(nèi)料槽、風(fēng)機等進行環(huán)境樣品檢測。國家非 洲豬瘟區(qū)域?qū)嶒炇?/span>(廣州)研究發(fā)現(xiàn),養(yǎng)殖場內(nèi)料槽樣品的病毒核 酸檢出時間早于豬只出現(xiàn)異常臨床癥狀的時間。

(三)科學(xué)采樣檢測

國家非洲豬瘟區(qū)域?qū)嶒炇?/span>(廣州)研究發(fā)現(xiàn),采取口鼻拭子聯(lián) 合尾根血混樣,或口鼻拭子聯(lián)合腹股溝淋巴結(jié)穿刺混樣的檢測采 樣方法,可提高病原檢出率.同時還應(yīng)當(dāng)采集臨床異常豬的前腔 靜脈血或尾靜脈血,分離血清后進行非洲豬瘟病毒抗體檢測.

采樣:使用聚丙烯材質(zhì)拭子,避免使用頭部為棉花制品的拭 子、含海藻酸鈣拭子以及木柄拭子,防止棉花纖維對蛋白質(zhì)吸附影 響病毒洗脫效果及抑制PCR反應(yīng)的物質(zhì)影響檢測結(jié)果。

樣品保存:樣品保存管應(yīng)使用無菌、對核酸無吸附作用的螺旋  蓋塑料管。每個樣品管應(yīng)再套一個樣品袋防止樣品泄露和污染。 新鮮采集的臨床標(biāo)本應(yīng)在2~8 ℃條件下,在采集后2~4h 內(nèi)送至  實驗室.用于病毒分離和核酸檢測的樣品應(yīng)當(dāng)盡快進行檢測,能

在24h內(nèi)檢測的樣品可置于4℃保存;24h 內(nèi)無法檢測的樣品則應(yīng)

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當(dāng)置于-70℃或以下保存(如無-70℃保存條件,則于-20℃冰箱暫 存）。

病原檢測方法:可采用非洲豬瘟病毒(P72/CD2v/MGF)  三重 實時熒光定量PCR 方法,也可采用發(fā)明專利 CN112646934B提供 的非洲豬瘟病毒(P72/EGFP/mChery) 三重實時熒光定量PCR 方 法檢測病毒核酸.對非常見基因變異且臨床癥狀特殊的病例,需 進一步送相關(guān)實驗室進行全基因組測序鑒別。

抗體檢測方法:采用《非洲豬瘟診斷技術(shù)》(GB/T18648) 規(guī)定 的間接 ELISA、阻斷 ELISA 等方法進行抗體檢測。

（四） 強化生物安全防護措施

我國非洲豬瘟防控實踐表明,落實好常態(tài)化防控措施能有效 阻止非洲豬瘟病毒感染.針對非洲豬瘟病毒變異株的流行特點, 要持續(xù)從人、車、物、豬等方面強化防控措施。

1.人員管理

人員在進場前3天不得去菜市場、豬場、屠宰廠(場)、無害化 處理廠(場) 及動物產(chǎn)品交易市場等生物安全高風(fēng)險場所.根據(jù) 不同區(qū)域生物安全等級進行人員管理,人員遵循單向流動原則,禁 止逆向進入生物安全更高級別區(qū)域。

進入辦公/生活區(qū)域人員:要更換干凈消毒過的衣服及鞋靴, 洗手消毒并有效淋浴后,方可進場,淋浴時必須注意指甲的清洗.

實踐表明,一次有效的淋浴(沐浴露和洗發(fā)水淋浴5分鐘以上) 可

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以消除人員體表攜帶的病毒;隨身物品經(jīng)消毒后入場,嚴禁攜帶豬 肉制品入場;未經(jīng)允許,禁止進入生產(chǎn)區(qū).進入生產(chǎn)區(qū)前,人員要 在生產(chǎn)區(qū)淋浴間洗澡,所攜帶物品須經(jīng)生產(chǎn)區(qū)物資消毒間消毒后, 方可帶入。

進入豬舍的流程:人員按照規(guī)定路線進入各自工作區(qū)域,禁止 進入未被授權(quán)的工作區(qū)域。每棟豬舍入口處都應(yīng)該放置消毒盆 (桶)、洗手消毒盆.進出豬舍前注意洗手,清洗、消毒工作靴,程 序為先刷洗鞋底、鞋面污物,后在腳踏消毒盆(桶) 浸 泡 消 毒 .人 員離開生產(chǎn)區(qū),將工作服放置含有消毒劑的桶中浸泡消毒.嚴禁 飼養(yǎng)人員互串豬舍。

2.車輛管理

豬場車輛管理:主要包括外來運豬車、飼料運送車、收集死豬/ 豬糞車、私家車等外部車輛;內(nèi)部運豬車、拉料車、運死豬/豬糞車 等內(nèi)部車輛。外部車輛進入場區(qū)需經(jīng)徹底清洗、消毒、烘干。

外來運豬車管理:外來運豬車應(yīng)為在畜牧獸醫(yī)部門登記的備 案車輛,經(jīng)過清洗、消毒及干燥后,方可接近豬場出豬臺或中轉(zhuǎn)站 ( 臺) .運輸后對車輛所經(jīng)道路進行徹底消毒.

飼料運送車管理:飼料運送車停放在場區(qū)外安全距離,對車體 和車輪進行消毒,卸下飼料后,由場內(nèi)人員對飼料外包裝表面消 毒.建議設(shè)置中轉(zhuǎn)料塔、場內(nèi)飼料運輸車,飼料可從場外直接輸送

到中轉(zhuǎn)料塔,運輸車輛不必進入豬場內(nèi).

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內(nèi)部運豬車管理:選擇場內(nèi)空間相對獨立的地點進行車輛洗 消和停放。運豬車使用完畢后立即到指定地點清洗、消毒及干燥。 流程包括:清洗,確保表面無污物;清潔劑處理有機物;消毒劑噴灑

消毒;充分干燥.

死豬/豬糞運輸車管理:死豬/豬糞運輸車專場專用。交接死 豬/豬糞時,避免與外部車輛接觸,交接地點距離場區(qū)大于100~  200 米.使用后,車輛及時清洗、消毒及干燥,并消毒車輛所經(jīng)道 路。

3.物資管理

豬場物資管理主要包括食材、生活物資、獸藥疫苗、飼料、設(shè)備 以及其他入場物資的管理。

入場食材管理:在入場食材的選取上,要求食材生產(chǎn)、流通背 景清晰、可控,無病原污染;禁止生鮮豬肉及制品入場;蔬菜和瓜果 類食材無泥土、無爛葉,禽類和魚類食材無血水,經(jīng)食品消毒處理 后入場.進入生產(chǎn)區(qū)的飯菜,應(yīng)由豬場廚房提供熟食,生鮮食材禁

止進入;飯菜容器經(jīng)消毒后進入.

入場獸藥疫苗管理:嚴格執(zhí)行進場消毒,疫苗及有溫度要求的 藥品,拆掉外層包裝,使用消毒劑浸泡消毒后再轉(zhuǎn)入儲存或立即使 用.其他常規(guī)藥品,拆掉外層包裝,經(jīng)烘干、或臭氧、或熏蒸消毒, 轉(zhuǎn)入儲存或立即使用。嚴格按照說明書或規(guī)程儲存、使用疫苗及

藥品,疫苗瓶和注射器等醫(yī)療廢棄物及時無害化處理.

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飼料管理:禁止從疫區(qū)購買玉米等飼料原料,確保飼料無病原 污染.了解購進的全價飼料是否含有動物源性飼料添加劑,避免 飼料中添加動物源性飼料添加劑,特別是乳豬料.飼料經(jīng)充分干 燥或加熱熟化后使用,所有飼料包裝袋均充分消毒(臭氧或熏 蒸).禁止飼喂餐廚剩余物.

4.豬群管理

避免場外散養(yǎng)或放養(yǎng):避免場外散養(yǎng)和放養(yǎng)模式,防止家豬與 野豬接觸,采食丟棄的垃圾食物.

實施"全進全出"管理制度:"全進全出"模式是豬場飼養(yǎng)管 理、減少疫病循環(huán)傳播的核心。

引進豬只管理:堅持自繁自養(yǎng)。引種時要嚴格采取檢測和隔 離措施.引種前需經(jīng)過非洲豬瘟等重大動物疫病檢測,抗原、抗體 檢測結(jié)果合格,可進行場外或場內(nèi)特定區(qū)域隔離檢疫,確認安全方 可引種.對僅飼養(yǎng)育肥豬的豬場,全部空欄消毒后再購入仔豬,應(yīng) 到非疫區(qū)、有良好聲譽和信用的正規(guī)養(yǎng)豬場,經(jīng)官方獸醫(yī)檢疫合格 后方可購進,密切關(guān)注豬只健康情況.

每日臨床巡視排查:做好非洲豬瘟的日常巡視排查,便于早發(fā) 現(xiàn)、早檢測、早處理。養(yǎng)殖場戶要加強學(xué)習(xí)和掌握非洲豬瘟防控知 識,每天進行健康檢查.一旦發(fā)現(xiàn)豬只表現(xiàn)精神不好,厭食,體溫 升高,皮膚發(fā)紅,皮膚壞死斑塊,關(guān)節(jié)腫大,母豬流產(chǎn)、乳房結(jié)痂等

臨床癥狀,發(fā)病、死亡豬只增多的情況,可采集口腔液、糞便拭子等

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送檢,發(fā)現(xiàn)陽性要及時向當(dāng)?shù)匦竽莲F醫(yī)部門報告.

豬只轉(zhuǎn)運管理:豬只轉(zhuǎn)運一般包括斷奶豬轉(zhuǎn)運、淘汰豬轉(zhuǎn)運、 育肥豬出欄轉(zhuǎn)運以及后備豬轉(zhuǎn)運.根據(jù)是否自有和可控,將運輸  車輛分為兩類:自有可控車輛可在豬場出豬間(臺) 進行豬只轉(zhuǎn)  運;非自有車輛不可接近豬場出豬間(臺) ,由自有車輛將豬只轉(zhuǎn)  運到中轉(zhuǎn)站(臺)交 接.

售豬管理:禁止生豬販運人員、承運人員等外來人員,以及外 來拉豬車輛進入養(yǎng)殖場。避免場內(nèi)外人員交叉。豬場趕豬人員嚴 禁接觸出豬間(臺)靠近場外生豬車輛的一側(cè),外來人員禁止接觸 出豬間(臺) 靠近場內(nèi)一側(cè).售豬前、后,立即對出豬間(臺)、停車 處、趕豬通道和裝豬區(qū)域進行全面清洗消毒。注意硬化出豬間 (臺) 及附近區(qū)域、趕豬通道,方便沖洗、消毒,采取防鼠、防雨水倒 流等措施。