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養(yǎng)殖技術(shù)
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| 胚胎移植 |
| 2024-02-03 08:11:05 |
| 胚胎移植又稱(chēng)受精卵移植，就是將1頭母畜(供體)的受精卵移植到另一頭母畜(受體)的子宮內(nèi)，使之正常發(fā)育，俗稱(chēng)“借腹懷胎”。 (一)胚胎移植的意義 1．充分發(fā)揮優(yōu)良母牛的繁殖潛力 一般情況下，1頭優(yōu)良成年母牛一年只能繁殖1頭犢牛，應(yīng)用胚胎移植技術(shù)，一年可得到幾頭至幾十頭優(yōu)良母牛的后代，大大加速了良種牛群的建立和擴(kuò)大。 2．誘發(fā)肉牛產(chǎn)雙胎 對(duì)發(fā)情的母牛配種后再移植一個(gè)胚胎到排卵對(duì)側(cè)子宮角內(nèi)。這樣配種后未受孕的母�？赡芤蚪邮芤浦驳呐咛ザ焉�，而配種后受母牛則由于增加了一個(gè)移植的胚胎而懷雙胎。另外，也可對(duì)未配種的母牛在兩側(cè)子宮角各移植一個(gè)胚胎而懷雙胎，從而提高生產(chǎn)效率。 3．應(yīng)用胚胎移植還可以減少肉用繁殖母牛的飼養(yǎng)頭數(shù)，可以代替種畜的引進(jìn)和保存品種資源等。 (二)胚胎移植的生理基礎(chǔ) 1．母牛發(fā)情后生殖器官的孕向發(fā)育 在發(fā)情后的最初一段時(shí)期(周期性黃體期)，不論是否已受精，母牛生殖系統(tǒng)均處于受精后的生理狀態(tài)之下，在生理現(xiàn)象上，妊娠與未孕并無(wú)區(qū)別。所以，發(fā)情后的母牛生殖器官的孕向變化，是進(jìn)行胚胎移植時(shí)使不配種的受體母牛可以接受胚胎，并為胚胎發(fā)育提供各種條件的主要生理學(xué)依據(jù)。 2．早期胚胎的游離狀態(tài) 胚胎在發(fā)育早期有相當(dāng)一段時(shí)間(附植之前)是獨(dú)立存在的，它的發(fā)育基本上靠本身貯存的養(yǎng)分，還未和子宮建立實(shí)質(zhì)性聯(lián)系。所以，在離開(kāi)活體情況下，在短時(shí)間內(nèi)可以存活。當(dāng)放回與供體相同的環(huán)境中，即可繼續(xù)發(fā)育。 3.胚胎移植不存在免疫問(wèn)題 受體母畜的生殖道(子宮和輸卵管)對(duì)于具有外來(lái)抗原物質(zhì)的胚胎和胎膜組織，一般來(lái)說(shuō)，在同一物種之內(nèi)，并沒(méi)有免疫排斥現(xiàn)象，這一點(diǎn)對(duì)胚胎由一個(gè)體移植給另一個(gè)體后而繼續(xù)發(fā)育極為有利。 4．胚胎和受體的聯(lián)系 移植的胚胎，在一定時(shí)期會(huì)和受體子宮內(nèi)膜建立生理上和組織上的聯(lián)系，從而保證了以后的正常發(fā)育。此外，受體并不會(huì)對(duì)胚胎產(chǎn)生遺傳上的影響，不會(huì)影響胚胎固有的優(yōu)良性狀。 (三)胚胎移植的操作原則 1．胚胎移植前后所處環(huán)境的一致性 即胚胎移植后的生活環(huán)境和胚胎的發(fā)育階段相適應(yīng)。包括生理上的一致性(即供體和受體在發(fā)情時(shí)間上的一致性)和解剖位上的一致性(即移植后的胚胎與移植前所處的空間環(huán)境的相似性)以及種屬一致性(即供體與受體應(yīng)屆同一物種，但并不排除種間移植成功的可能性)。 2．胚胎收集期限 胚胎收集和移植的期限(胚胎的日齡)不能超過(guò)周期黃體的壽命，最遲要在周期黃體退化之前數(shù)日進(jìn)行移植。通常是在供體發(fā)情配種后3一s日內(nèi)收集和移植胚胎。 3.在全部操作過(guò)程中，胚胎不應(yīng)受到任何不良因素(物理的、化學(xué)的、微生物的)的影響而危及生命力。移植的胚胎必須經(jīng)鑒定并認(rèn)為是發(fā)育正常者。 (四)胚胎移植的基本程序 胚胎移植的基本程序包括供體超排與授精，受體同期發(fā)情處理、采卵、檢卵和移植。關(guān)于超排和同期發(fā)情處理在前面已有敘述，本書(shū)僅介紹采卵、檢卵和移植。 1．胚胎回收(采卵) 從供體收集胚胎的方法肴手術(shù)法和非手術(shù)法兩種。 (1)手術(shù)法 按外科剖腹術(shù)的要求進(jìn)行術(shù)前準(zhǔn)備。手術(shù)部位位于右肋部或腹下乳房至臍部之間的腹白線處切開(kāi)。伸進(jìn)食指找到輸卵管和子宮角，引出切口外。如果在輸精后3—4天期間釆卵，受精卵還未移行到子宮角，可采用輸卵管沖卵的方法。將一直徑2毫米，長(zhǎng)約10厘米的聚乙烯管從輸卵管腹腔口插入2—3厘米，另用注射器吸取5—10毫升30℃左右沖卵液，連接7號(hào)針頭，在子宮角前端刺人，再送人輸卵管峽部，注入沖卵液。穿刺針頭應(yīng)磨鈍，以免損傷子宮內(nèi)膜；沖洗速度應(yīng)緩慢，使沖洗液連續(xù)地流出。如果在輸精后5天收胚，還必須做子宮角沖胚。即用10一15毫升沖卵液由宮管結(jié)合部子宮角上部向子宮角分叉部沖洗。為了使沖卵液不致由輸卵管流出，可用止血鉗夾住宮管結(jié)合部附近的輸卵管，在于宮角分叉 部插入回收針，并用腸鉗夾住子宮與回收針后部，固定回收針，并使沖卵液不致流人子宮體內(nèi)。 (2)非手術(shù)法 非手術(shù)采卵一般在輸精后5—7天進(jìn)行�？刹捎枚穼�(dǎo)管的沖卵器。二路式?jīng)_卵器是由帶氣囊的導(dǎo)管與單路管組成。導(dǎo)管中一路為氣囊充氣用，另一路為注入和回收沖卵液用。 導(dǎo)管中插1根金屬通桿以增加硬度，使之易于通過(guò)子宮頸。一般用直腸把握法將導(dǎo)管經(jīng)子宮頸導(dǎo)人子宮角。為防止子宮頸緊縮及母牛努責(zé)不安，采卵時(shí)可在腰薦或尾椎間隙用2％的普魯卡因或利多卡因5—10毫升進(jìn)行硬膜外腔麻醉。操作前洗凈外陰部并用酒精消毒。為防止導(dǎo)管在陰道內(nèi)被污染，可用外套膜(有商品出售)套在導(dǎo)管外，當(dāng)導(dǎo)管進(jìn)人子宮頸后，扯去套膜。將導(dǎo)管插入一側(cè)子宮角后，從充管向氣囊充氣，使氣囊脹起并觸及子宮角內(nèi)壁，以防止沖卵液倒流。然后抽出通桿，經(jīng)單路管向子宮角注入沖卵液，每次15—50毫升，沖洗5—6次，并將沖卵液收集在漏斗形容器中。為更多地回收沖卵液，可在直腸內(nèi)輕輕按摩子宮角。用同樣方法沖洗對(duì)側(cè)子宮角。 沖卵液多數(shù)為組織培養(yǎng)液，如林格氏液、杜氏磷酸鹽緩沖液(PE)、布林斯特氏液(BMOC-3)和TCM—199等。常用的為杜氏磷酸鹽緩沖液，加入0．4％的牛血清白蛋白或1％一10％犢牛血清。 沖卵液溫度使用時(shí)應(yīng)為35—37℃，每毫升要加入青霉素1000國(guó)際單位，鏈霉素500—1000微克，以防止生殖道感染。 2．胚胎檢查 (1)檢卵 將收集的沖卵液于37℃溫箱內(nèi)靜置10一15分鐘。胚胎沉底后，移去上層液。取底部少量液體移至平皿內(nèi)，靜置后，在實(shí)體顯微鏡下先在低倍(10一20倍)下檢查胚胎數(shù)量，然后在較大倍數(shù)(50—100倍)下觀察胚胎質(zhì)量。 (2)吸卵 吸卵是為了移取、清洗、處理胚胎，要求目標(biāo)準(zhǔn)確，速度快，帶液量少，無(wú)丟失。吸卵可用1毫升的注射器裝上特別的吸頭進(jìn)行，也可使用自制的吸卵管。 (3)胚胎質(zhì)量鑒定 正常發(fā)育的胚胎，其中細(xì)胞(卵裂球)外形整齊，大小一致，分布均勻，外膜完整。無(wú)卵裂現(xiàn)象(未受精)和異常卵(外膜破裂、卵裂球破裂等)都不能用于移植。 3．胚胎移植 (1)手術(shù)移植 先將受體母牛作好術(shù)前準(zhǔn)備。已配種母牛，在右肋部切口，找到非排卵側(cè)子宮角，再把吸有胚胎的注射器或移卵管刺入子宮角前端，注人胚胎；未配母牛在每側(cè)子宮角各注入一個(gè)胚胎；然后將子宮復(fù)位，縫合切口。 (2)非手術(shù)移植 非手術(shù)移植一般在發(fā)情后第六至第九天(即胚泡階段)進(jìn)行，過(guò)早移植會(huì)影響受胎率。在非手術(shù)移植中采用胚胎移植槍和0．25毫升細(xì)管移植的效果較好。將細(xì)管截去適量，吸入少許保存液，吸一個(gè)氣泡，然后吸人含胚胎的少許保存液，吸人一個(gè)氣泡，最后再吸取少許保存液。將裝有胚胎的吸管裝入移植槍內(nèi)，通過(guò)子宮頸插入子宮角深部，注入胚胎。非手術(shù)移植要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程，以防生殖道感染 |
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